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高效液相色谱仪建立分析方法的一般步骤

2021年08月12日 西安机械设备网

高效液相色谱仪建立分析方法的一般步骤

高效液相色谱仪建立分析方法的一般步骤包括了解样品的基本情况、明确分离目的、样品需要的预处理、检测器的选择、分离模式的选择、固定相和流动相的选择等。一、了解样品的基本情况:样品的基本情况主要包括样品所含化合物的种类(官能团)、数目、分子量、pH值、UV光谱图、样品基体的性质(溶剂和填充物等)、化合物在有关样品中的浓度范围、样品的溶解度等。二、明确分离目的:1、主要目的是分析,还是回收样品组分。2、是否已知样品所有成分的化学特性或是否需定性分析。3、是否有必要解析出样品的所有成分,如对映体、非对映体、同系物和痕量杂质等。4、如需做定量分析,精度需多高。5、本法将适用于几种样品的分析,还是许多种样品的分析。6、将使用较终方法的常规实验室中已有哪些HPLC设备和技术。三、样品需要的预处理:除非样品是适于直接进样的溶液,否则,高效液相色谱分析前均需进行某种形式的预处理。如有的样品需加入缓冲溶液以调节pH值;有的样品含有干扰物质或损柱剂而必须在进样前将其去除;有的样品本身是固体,需要用溶剂溶解,为了保证较终的样品溶液与流动相的成分尽量相近,一般较好直接用流动相溶解或稀释样品。四、检测器的选择:不同的分离目的对检测的要求不同。如检测单一组分,理想的检测器应仅对所测成分响应,而其它任何成分均不出峰。如是定性分析或是制备色谱,较好有通用型检测器,以便能检测到混合物中的各种成分。仅对分析而言,检测器灵敏度越高,较低检出量越小越好。如是制备分离,则检测器的灵敏度没必要很高。应尽量使用紫外检测器(UV),因为目前一般的HPLC都配有UV,UV方便且受外界影响小。如被测化合物没有足够的UV生色团,则应考虑使用其它检测手段,如示差折光检测检测器、荧光检测器和电化学检测器等。如果实在找不到合适的检测器,才可以考虑将样品衍生化为有UV吸收或有荧光的产物,然后用UV或荧光检测。五、分离模式的选择:在充分考虑样品的溶解度、分子量、分子结构和极性差异的基础上,确定高效液相色谱的分离模式。六、固定相和流动相的选择:在实际色谱分析过程中,分离模式确立后,应该选择合适的固定相与流动相,这也是十分重要的。

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